液相色譜柱樣品的前處理及流動(dòng)相流速的選擇
湖南弘林科學(xué)儀器有限公司 / 2023-02-20
在使用實(shí)驗(yàn)室設(shè)備色譜柱之前,最好對(duì)色譜柱的性能進(jìn)行測(cè)試,并將結(jié)果保存下來(lái),作為日后評(píng)估色譜柱性能變化的參考。但需要注意的是,由于樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的不同,色譜柱性能可能會(huì)有所不同;另外,色譜柱性能測(cè)試是按照色譜柱出廠(chǎng)報(bào)告中的條件進(jìn)行的(出廠(chǎng)測(cè)試中使用的條件是最好的),只有這樣,測(cè)得的結(jié)果才具有可比性。
1.樣品預(yù)處理:
1)最好用流動(dòng)相溶解樣品。
2)用預(yù)處理柱去除樣品中強(qiáng)極性或柱填料不可逆吸附的雜質(zhì)。
3)用0.45μm濾膜去除顆粒雜質(zhì)。
2.流動(dòng)相的制備:
液相色譜是通過(guò)柱填料和流動(dòng)相之間的質(zhì)量交換實(shí)現(xiàn)樣品組分的分離,因此要求流動(dòng)相具有以下特性:
1)流動(dòng)相相對(duì)于樣品有一定的溶解度,以保證樣品成分不會(huì)在柱內(nèi)沉淀(或長(zhǎng)時(shí)間留在柱內(nèi))。
2)流動(dòng)相是惰性的,不與樣品發(fā)生反應(yīng)(特殊情況除外)。
3)流動(dòng)相的粘度應(yīng)盡可能小,這樣在使用長(zhǎng)分析柱時(shí)才能獲得良好的分離效果;同時(shí)可以降低色譜柱的壓降,延長(zhǎng)液泵的使用壽命(提高溫度可以降低流動(dòng)相的粘度)。
4)流動(dòng)相的物理和化學(xué)性質(zhì)應(yīng)適合所用的檢測(cè)器。如果使用紫外檢測(cè)器,最好使用低紫外吸收的溶劑。
5)流動(dòng)相的沸點(diǎn)不能太低,否則容易產(chǎn)生氣泡,使實(shí)驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。
6)流動(dòng)相配好后,必須脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體不僅有利于檢測(cè),而且可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品相互作用。
3.流動(dòng)相流速的選擇:
因?yàn)橹侵辛鲃?dòng)相的線(xiàn)速度的函數(shù),所以通過(guò)使用不同的速度可以獲得不同的柱效。對(duì)于特定的色譜柱,為了追求最佳的柱效,最好使用最佳的流速。內(nèi)徑為4.6mm的色譜柱,流速一般為1ml/min,內(nèi)徑為4.0mm的色譜柱,流速為0.8ml/min。
當(dāng)選擇最佳流速時(shí),分析時(shí)間可能會(huì)延長(zhǎng)??刹捎酶淖兞鲃?dòng)相洗滌強(qiáng)度的方法來(lái)縮短分析時(shí)間(如使用反相柱時(shí)可適當(dāng)增加甲醇或乙腈的含量)。